綠膿桿菌是能夠引起急性、高度傳染性疾病的、 可以導致水貂出血性肺炎的一種細菌。本菌革蘭氏 染色呈陰性,單個、成雙或短鏈狀存在,能單向運 動,無芽孢,能形成莢膜,能分泌綠膿菌素和熒光素。超凈工作臺(SW.CJ.2FD)購自上海博迅實業 有限公司醫療設備公司;空氣恒溫搖床(KYC111) 購自上海?,攲嶒炘O備有限公司;PCR 儀(T100TM Thermal Cycler)購自伯樂生命醫學產品有限公 司;電熱恒溫水槽(DK-8D)購自上海精宏實驗設 備有限公司;隔水式培養箱(BG-160)購自上海博 迅實業有限公司醫療設備廠;光學正置顯微鏡(Axio Lab. A1)購自卡爾蔡司公司。
將綠膿桿菌菌種復蘇后分別用接種環劃線接種 于 PYG 平板,置 37 ℃培養 18 h。各挑取單菌落再 次分別劃線接種于 PYG 平板,置 37 ℃培養 18 h, 各用 5 mL 生理鹽水將平板上的菌落洗下,制備成 濃度均一的凝集原(菌數為 8×109 CFU/mL),2 ~ 8 ℃保存備用。準備潔凈的載玻片,用記號筆分區 標記后,取 20 μL 制備的綠膿桿菌凝集原滴于載玻 片上,再取待檢的水貂血清(簡稱待檢血清) 20 μL 置于凝集原上,同時取 20 μL 綠膿桿菌凝集 原加 20 μL 生理鹽水作為陰性對照,取 20 μL 綠膿 桿菌凝集原加 20 μL 綠膿桿菌抗水貂陽性血清(玻 片凝集反應至少出現“+++”)作為陽性對照,用 槍頭將凝集原和待檢血清混合,在 30 ~ 60 s 內用 肉眼觀察結果。